論烏龍丹對(duì)大鼠局灶性腦缺血腦組織氧自由基的影響
論文關(guān)鍵詞：烏龍丹；氧自由基；大鼠局灶性腦缺血模型論文摘要：目的：觀察烏龍丹對(duì)大鼠局灶性腦缺血腦組織中氧自由基的影響。方法：復(fù)制大鼠局灶性腦缺血病理模型，于缺血后24h，取腦組織測(cè)定SOD活性及MDA含量。結(jié)果：缺血24h后，腦組織SOD活性明顯降低而MDA含量明顯升高(P＜0.05)；烏龍丹可使腦組織中SOD活性提高，同時(shí)使MDA含量降低(P＜0.05)。結(jié)論：烏龍丹抗缺血性腦損傷的作用機(jī)理可能與其減輕氧自由基毒性反應(yīng)有關(guān)。
缺血性腦病是常見病、多發(fā)病，現(xiàn)代表明，氧自由基的毒性作用是引發(fā)腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞損害病理級(jí)聯(lián)反應(yīng)的重要環(huán)節(jié)，本實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)烏龍丹對(duì)大鼠局灶性腦缺血模型中腦組織氧自由基的變化情況，以探討治療缺血性腦病臨床經(jīng)驗(yàn)方烏龍丹是否可通過影響缺血腦組織中氧自由基的含量，從而起到神經(jīng)元保護(hù)作用。
1 實(shí)驗(yàn)
烏龍丹物，由南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院房提供，加工為流浸膏(2.5g/mL)；MDA、SOD試劑盒(南京建成生物制品研究所)，蛋白定量試劑盒(伊利康生物工程研究所)，分析純冰乙酸，20％磷鎢酸溶液，0.8％硫代巴比妥酸(TBA)溶液(南方醫(yī)科大學(xué)試劑中心)；754型紫外分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)，高速低溫離心機(jī)(美國貝克曼公司)。
2 實(shí)驗(yàn)分組
Wistar大鼠36只，清潔級(jí)，雌雄各半，體重(250±20)g，批號(hào)2004A068，由南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分成正常組、假手術(shù)組、模型組，烏龍丹低劑量組、中劑量組、高劑量組。給藥組術(shù)前灌服烏龍丹流浸膏，給藥7天，低、中、高給量分別為1、2、4mL，正常組、假手術(shù)組和模型組灌服2mL生理鹽水。于末次給藥后2h造模，術(shù)后連續(xù)給藥，24h后處死。
3 實(shí)驗(yàn)方法
3．1 模型制備 假手術(shù)組只做開顱術(shù)，不結(jié)扎血管；模型組與實(shí)驗(yàn)組開顱制作大鼠局灶性腦缺血模型，操作過程如下：結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈，夾閉左側(cè)頸總動(dòng)脈，阻斷右側(cè)大腦中動(dòng)脈。
3．2 樣品制備 造模后24h立即處死動(dòng)物，準(zhǔn)確稱取右側(cè)大腦，在冰浴上分離出缺血區(qū)腦組織，以冰鹽水沖洗后除去殘血，吸干后稱重，按1:9(W:V)比例加入冰生理鹽水，制成10％腦勻漿液，離心1000×g，10min(4℃)，取上清液檢測(cè)。
3．3 指標(biāo)檢測(cè) 蛋白含量測(cè)定用Lowery法，SOD檢測(cè)用黃嘌呤氧化酶法，MDA檢測(cè)用TBA顯色法，均按試劑盒說明完成。
3．4 學(xué)處理 采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。各項(xiàng)指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多組間計(jì)量資料采用單因素方差分析，P＜0.05定義為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
4 結(jié) 果
缺血24h后，與正常組對(duì)比，模型組腦組織中SOD活性減低、MDA含量升高(P＜0.05)；與模型組對(duì)比，烏龍丹3個(gè)劑量組均可提高SOD活性并降低腦組織MDA含量(P＜0.05)。
5 討 論
腦缺血后，由于能量缺乏：鈣泵功能失調(diào)，細(xì)胞膜去極化，大量的興奮性氨基酸釋放，激活鈣通道，導(dǎo)致細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流，過量的Ca2+激活胞內(nèi)依賴于Ca2+蛋白水解酶．黃嘌呤還原酶迅速轉(zhuǎn)變?yōu)辄S嘌呤氧化酶，同時(shí)缺血條件下ATP產(chǎn)生大量游離腺苷，降解為次黃嘌呤，次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶催化下轉(zhuǎn)化為黃嘌呤，在轉(zhuǎn)化過程中生成超氧陰離子等多種自由基，大量形成的氧自由基攻擊蛋白、脫氧核酸和脂質(zhì)膜，破壞細(xì)胞的功能和結(jié)構(gòu)完整性，因而導(dǎo)致細(xì)胞的損害，實(shí)驗(yàn)表明應(yīng)用自由基清除劑可有效減輕缺血性腦細(xì)胞損傷。
烏龍丹是名老臧堃堂教授經(jīng)驗(yàn)方，全方由生黃芪、葛根、制首烏、川芎、丹參、地龍、全蝎、制僵蠶、水蛭、生曬參、石蒲、女貞子、白術(shù)、當(dāng)歸等14味組成，諸藥合用具有益氣話血、補(bǔ)腎填髓、化瘀通絡(luò)的功效。本方治則以益氣活血為主，是以補(bǔ)陽還五湯為基礎(chǔ)化裁擬制，已有實(shí)驗(yàn)證明補(bǔ)陽還五湯具有抗自由基毒性作用。本研究結(jié)果顯示：(1)缺血24h腦組織SOD活性降低、MDA含量升高；證實(shí)在大鼠局灶性腦缺血模型神經(jīng)元損傷病理過程中存在自由基毒性病理反應(yīng)。(2)烏龍丹可提高缺血后腦組織中SOD活性并降低MDA含量，而SOD及MDA是反映自由基損傷的指標(biāo)，SOD能清除自由基而具有抗自由基損傷作用，NDA為脂質(zhì)過氧化物的代謝產(chǎn)物，其含量的多少在一定程度上反映組織細(xì)胞損傷的程度，因而這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明烏龍丹減弱了自由基的毒性反應(yīng)，起到了抗氧化作用，從而產(chǎn)生了對(duì)缺血后神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。其作用機(jī)制可能是烏龍丹在自由基的生成過程某些環(huán)節(jié)中起到良性的調(diào)節(jié)作用，或增強(qiáng)了機(jī)體清除自由基能力，減輕自由基毒性反應(yīng)所引起神經(jīng)細(xì)胞損害，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究探討。
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